يتم تصنيف وسط الاستزراع حسب الاستخدام
وفقًا للاستخدامات المختلفة ، يمكن تقسيم وسط الاستزراع إلى وسط استزراع أساسي ، وسط استزراع غذائي ، وسط ثقافة إثراء ، وسط ثقافة انتقائية ، وسط ثقافة تحديد ، وسط ثقافة لاهوائية ، إلخ.
1. الوسائط الأساسية هي الأساس الغذائي الذي تحتاجه معظم الكائنات الحية الدقيقة. إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة لها احتياجات خاصة ، فيمكنها إضافة بعض المكونات على هذا الأساس ، مثل ماء الببتون ، ووسيط استزراع المرق ، وآجار المغذيات ، وما إلى ذلك ، 1 ٪ وسط ماء ببتون هو أبسط وسط أساسي. يمكن استخدام هذه الوسيلة الأساسية في ثقافة الإثراء البكتيري العامة واختبار الركيزة النيلي. إذا تم إضافة المؤشرات والسكريات ، فسيتم تحضيرها في وسط تخمير السكر لاختبار تخمير السكر وتصبح وسيلة تحديد ؛ إذا زادت جرعة كلوريد الصوديوم في ماء الببتون بنسبة 1٪ وارتفع الرقم الهيدروجيني إلى حوالي 8.6 ، فسيصبح ماء ببتون قلويًا من أجل ثقافة تخصيب ضمة الكوليرا ويصبح وسيطًا خاصًا للتخصيب.
2. تضيف وسائط المغذيات بعض العناصر الغذائية الخاصة ، مثل الجلوكوز والدم والمصل ومستخلص الخميرة وعوامل النمو وما إلى ذلك ، إلى وسط الاستزراع الأساسي ، بحيث يمكن أن تنمو فيه البكتيريا ذات المتطلبات الغذائية العالية. تحتاج العقدية الرئوية ، وما إلى ذلك ، إلى النمو في وسط يحتوي على دم أو مصل ؛ يجب إضافة البيض والبطاطس والجلسرين وما إلى ذلك إلى وسط استزراع المتفطرة السلية. الوسيط الغذائي الأكثر استخدامًا هو طبق أجار الدم.
3. إن وسائط التخصيب هي بشكل عام وسط سائل يستخدم لتخصيب البكتريا. يمكن استخدامه على نطاق واسع أو بشكل خاص. غالبًا ما تحتوي وسائط التخصيب الخاصة على مغذيات خاصة أو عوامل نمو يتطلبها نمو البكتيريا المستهدفة.
4. الوسائط الانتقائية: تحتوي الوسائط الانتقائية على مغذيات (مبيدات جراثيم) وعوامل جراثيم (محددات). بعد تلقيح العينة في مثل هذه الوسائط ، يتم تثبيط البكتيريا غير المستهدفة بدرجات متفاوتة بسبب التثبيط الانتقائي لعوامل جراثيم ، مما يؤدي إلى تكاثر أو فصل البكتيريا المستهدفة. يمكن تحسين معدل الاكتشاف الإيجابي للبكتيريا المستهدفة باستخدام الوسيط الانتقائي لفترة زمنية معينة ثم تلقيحها في وسط التحديد الانتقائي. هناك أنواع عديدة من العوامل الجراثيم ، مثل الأخضر الملاكيت ، الأخضر اللامع ، سيلينيت الصوديوم ، ديوكسيكولات الصوديوم ، الملح الصفراوي ، سلفونات رباعي كبريتيد الصوديوم ، ومضادات حيوية مختلفة. يجب أن تكون كمية إضافة عوامل جراثيم مناسبة ودقيقة. بعضها شديد السمية وبعضها لا يقاوم الحمى الشديدة. يجب إيلاء اهتمام خاص للتحضير.
5. الوسط التفاضلي عبارة عن ركيزة تفاعل ومؤشر يضاف إلى وسط الاستزراع لتمييز خصائص بعض الكائنات الحية الدقيقة والتعرف عليها. يمكن تقسيمها إلى وسيلة تعريف عامة ووسيلة تعريف انتقائية. يُطلق على الوسيط الذي يستخدم فقط للتمييز بين الأنواع الميكروبية المختلفة وسيط التعريف العام. بشكل عام ، لا يضيف هذا النوع من الوسط عوامل جراثيم ولكنه يحتوي فقط على مؤشرات ، مثل وسيط الحديد bisaccharide الخاص بـ Kirschner ، والذي يحتوي على الجلوكوز واللاكتوز. يستخدم الفينول الأحمر كمؤشر لمراقبة تغير لون الركيزة المزروعة والسطح المائل لتحديد قدرة التخمير للبكتيريا على الجلوكوز واللاكتوز. إضافة سترات الأمونيوم الحديديك ، بعد الزراعة ، مراقبة ما إذا كان هناك ترسب أسود لتحديد ما إذا كانت البكتيريا تتحلل الأحماض الأمينية المحتوية على الكبريت في الببتون لإنتاج كبريتيد الهيدروجين ؛ مثال آخر هو أجار إيوزين ميثيلين الأزرق ، الذي يحتوي على اللاكتوز (ركيزة تفاعل) ويوزين ميثيلين أزرق (مؤشر) لتحديد الإشريكية القولونية والبكتيريا الممرضة المعوية والبكتيريا المتنوعة الأخرى. يتميز وسيط التحديد العام باحتوائه على مؤشرات في الصيغة ويمكن استخدامه لتمييز الأنواع المختلفة من الكائنات الحية الدقيقة. يمكن أيضًا استخدام بعض وسائط التعريف كاحتياجات خاصة للبكتيريا لعزل واستنبات بعض البكتيريا ، مثل أجار تريبتون فول الصويا وأجار الدم الملون بالشوكولاتة. الذي يحتوي على اللاكتوز (ركيزة تفاعل) ويوزين ميثيلين أزرق (مؤشر) لتحديد الإشريكية القولونية والبكتيريا المسببة للأمراض المعوية والبكتيريا المتنوعة الأخرى. يتميز وسيط التحديد العام باحتوائه على مؤشرات في الصيغة ويمكن استخدامه لتمييز الأنواع المختلفة من الكائنات الحية الدقيقة. يمكن أيضًا استخدام بعض وسائط التعريف كاحتياجات خاصة للبكتيريا لعزل واستنبات بعض البكتيريا ، مثل أجار تريبتون فول الصويا وأجار الدم الملون بالشوكولاتة. الذي يحتوي على اللاكتوز (ركيزة تفاعل) ويوزين ميثيلين أزرق (مؤشر) لتحديد الإشريكية القولونية والبكتيريا المسببة للأمراض المعوية والبكتيريا المتنوعة الأخرى. يتميز وسيط التحديد العام باحتوائه على مؤشرات في الصيغة ويمكن استخدامه لتمييز الأنواع المختلفة من الكائنات الحية الدقيقة. يمكن أيضًا استخدام بعض وسائط التعريف كاحتياجات خاصة للبكتيريا لعزل واستنبات بعض البكتيريا ، مثل أجار تريبتون فول الصويا وأجار الدم الملون بالشوكولاتة.
يتم إضافة بعض المثبطات والمؤشرات إلى وسط الاستزراع لمنع نمو بعض البكتيريا ، وتعزيز انتشار البكتيريا المستهدفة ، وجعل المستعمرات البكتيرية المتنامية لها خصائص معينة لتسهيل التحديد والاختيار. يسمى هذا النوع من وسط الثقافة بوسيط التحديد الانتقائي. على سبيل المثال ، يحتوي SS Agar على اللاكتوز (ركيزة التفاعل) ، والأحمر المحايد ، وسيترات الأمونيوم الحديديك (المؤشر) ، والملح الأخضر اللامع والصفراء (عامل جراثيم) في الصيغة المتوسطة. العوامل الجراثيم مثل الملح الأخضر اللامع والملح الصفراوي يمكن أن تمنع نمو البكتيريا موجبة الجرام وبعض الإشريكية القولونية ، ولكن ليس لها تأثير على السالمونيلا والشيجيلا. علاوة على ذلك ، يمكن للإشريكية القولونية أن تخمر اللاكتوز لإنتاج حمض ، مما يجعل المستعمرات حمراء. السالمونيلا والشيجيلا لا تخمر اللاكتوز ، ومستعمراتهم عديمة اللون. إذا أنتجت البكتيريا كبريتيد الهيدروجين ، فسوف تتفاعل مع سترات الأمونيوم الحديديك لتكوين ترسيب كبريتيد الحديدوز ، ويكون مركز المستعمرة أسود أو بني. وذلك لتحقيق الغرض من تحديد الهوية.
في السنوات الأخيرة ، تم تطوير وسط تطوير لوني خاص لبعض البكتيريا في الداخل والخارج باستخدام الإنزيمات المحددة لبعض البكتيريا واختيار الركائز المقابلة. تم استخدامه لعزل وتحديد البكتيريا وحصل على نتائج جيدة. وسيط تطوير اللون هذا هو في الواقع وسيلة تحديد الهوية. المبدأ الأساسي هو إضافة مزيج من الكروموجين (أو الفلوروجين) وركيزة العمل البكتيري في وسط الاستزراع ، وعندما تحتوي البكتيريا على إنزيمات مقابلة ، سيتم تحلل المجموعة لتطوير اللون (أو عرض التألق). على سبيل المثال ، يتحلل اتحاد الكروموجين جليكوسيد تحت تأثير الجليكوزيداز لفصل الجليكوسيد عن الكروموجين وعرض اللون ؛ تُظهر اتحادات الأحماض الأمينية الفلورية (بدون تألق) تألقًا عن طريق فصل الأحماض الأمينية عن المواد الفلورية تحت تأثير أمينوبيبتيداز. الكروموجينات الشائعة لتطوير اللون هي: α- Naphthol β- Naphthol، o-nitrophenol، p-nitrophenol، p-nitroaniline، phenolphthalein، 2-amino، 4-nitrobenzene ، إلخ ؛ تشمل الفلوروفورات شائعة الاستخدام 4-ميثيلومبيليفيرون (المعروف أيضًا باسم 7-هيدروكسي-4-ميثيل كومارين) وما إلى ذلك. في الوقت الحاضر ، تم استخدام وسيط تطوير اللون لعزل وتعريف وثقافة مجموعة متنوعة من البكتيريا أو الفطريات ، مثل السالمونيلا ، والإشريكية القولونية ، والليستيريا ، والبيفيدوباكتيريوم ، واللاكتوباسيلوس ، والمبيضات البيضاء وغيرها من وسائط تطوير الألوان. α- النفثول β- النفثول ، أو- نيتروفينول ، ف- نيتروفينول ، ف-نيتروانيلين ، الفينول فثالين ، 2-أمينو ، 4-نيتروبنزين ، إلخ ؛ تشمل الفلوروفورات شائعة الاستخدام 4-ميثيلومبيليفيرون (المعروف أيضًا باسم 7-هيدروكسي-4-ميثيل كومارين) وما إلى ذلك. في الوقت الحاضر ، تم استخدام وسيط تطوير اللون لعزل وتعريف وثقافة مجموعة متنوعة من البكتيريا أو الفطريات ، مثل السالمونيلا ، والإشريكية القولونية ، والليستيريا ، والبيفيدوباكتيريوم ، واللاكتوباسيلوس ، والمبيضات البيضاء وغيرها من وسائط تطوير الألوان. α- النفثول β- النفثول ، أو- نيتروفينول ، ف- نيتروفينول ، ف-نيتروانيلين ، الفينول فثالين ، 2-أمينو ، 4-نيتروبنزين ، إلخ ؛ تشمل الفلوروفورات شائعة الاستخدام 4-ميثيلومبيليفيرون (المعروف أيضًا باسم 7-هيدروكسي-4-ميثيل كومارين) وما إلى ذلك. في الوقت الحاضر ، تم استخدام وسيط تطوير اللون لعزل وتعريف وثقافة مجموعة متنوعة من البكتيريا أو الفطريات ، مثل السالمونيلا ، والإشريكية القولونية ، والليستيريا ، والبيفيدوباكتيريوم ، واللاكتوباسيلوس ، والمبيضات البيضاء وغيرها من وسائط تطوير الألوان.
هناك أيضًا بعض وسائط التعريف التي تستخدم أنظمة إنزيمات مختلفة فريدة للبكتيريا لتتحلل وتستخدم أنواعًا مختلفة من السكريات أو الكحوليات أو الأحماض الأمينية أو ركائز أخرى لإنتاج الأحماض أو الغازات أو القلويات أو غيرها من المواد المرئية ، وذلك للتعرف على البكتيريا ، كما هو شائع الوسائط البيوكيميائية المستخدمة.
يتميز وسط الاستزراع المستخدم في اختبار الخصائص البيوكيميائية للبكتيريا بإضافة ركيزة معينة إلى وسط الاستزراع الأساسي الخالي من السكر وإضافة مؤشر. يتم أخيرًا عرض سلسلة من نتائج التفاعل الكيميائي الحيوي للبكتيريا في وسط الاستزراع هذا من خلال المؤشر. هذا النوع من الوسط هو وسيلة تحديد تفاعل كيميائي حيوي. وفقًا للجرعة ، يمكن تقسيمها إلى وسط بيوكيميائي رئيسي ووسط كيميائي حيوي ثانوي. وتجدر الإشارة إلى أن بعض مكونات وسط الاختبار البيوكيميائي تتأثر بالعديد من العوامل ، مثل ارتفاع درجة الحرارة ودرجة الحموضة. عند التحضير والاستخدام ، يجب أن يتم التحكم فيه بدقة وفقًا للوضع الفعلي لمنع تلف المكونات الفعالة ، وذلك لضمان تأثير استخدامها.
6. الوسائط اللاهوائية هي وسيلة لعزل ، واستنبات ، والتعرف على البكتيريا اللاهوائية ، والتي تسمى الوسائط اللاهوائية. بسبب نقص الإنزيمات المختلفة اللازمة لعملية التمثيل الغذائي الهوائي ، مثل السيتوكروم وأكسيداز السيتوكروم ، الكاتلاز والبيروكسيديز ، وسوبروكسيد ديسموتاز ، فإن اللاهوائيات غير قادرة على القيام بعملية التمثيل الغذائي الهوائي بسبب عيوبها الأيضية ، والطاقة المتولدة من التخمر اللاهوائي هي غير كافٍ. لذلك ، لا يمكن أن تنمو اللاهوائية وتعيش في بيئة الغلاف الجوي العادية. من أجل تمكين البكتيريا اللاهوائية من النمو بشكل طبيعي ، من الضروري إعداد وسط خاص يحتوي على مغذيات غنية وإمكانية منخفضة للأكسدة وعوامل نمو خاصة.
عادة ما يتم تحضير وسط الاستزراع اللاهوائي من القلب أو الدماغ أو مستخلصات الأعضاء الأخرى ، وغالبًا ما يكون من الضروري إضافة ثيوجليكولات الصوديوم والسيستين وبقايا اللحوم والحديد المختزل والكربون المنشط وعوامل الاختزال الأخرى أو مواد إزالة الأكسدة. من أجل مراقبة محتوى الأكسجين في وسط الاستزراع ، يمكن أيضًا إضافة اللازورول أو الميثيلين الأزرق إلى وسط الثقافة السائلة كمؤشر للأكسدة والاختزال. يحتوي القلب ومستخلص المخ وكتلة الكبد وبقايا اللحوم على أحماض دهنية غير مشبعة يمكنها امتصاص الأكسجين في وسط المزرعة. يعتبر ثيوجليكولات الصوديوم والسيستين من عوامل الاختزال القوية ، والتي يمكن أن تستهلك الأكسجين المذاب في وسط المزرعة. يمكن للكربون المنشط الجاف والقطن الماص أيضًا امتصاص الأكسجين في وسط الاستزراع. وبالتالي، الغرض من إضافة عامل الاختزال وامتصاص المواد إلى وسط الثقافة هو خلق بيئة نقص الأكسجين لوسط الثقافة والحفاظ على إمكانية منخفضة للأكسدة والاختزال. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إضافة طبقة من البارافين السائل على سطح وسط الاستزراع لعزل التلامس بين وسط الاستزراع والغلاف الجوي.
7. سائل الخلية المستنبتة (LCL) يشير إلى السائل المستخدم في زراعة الأنسجة الحية والأعضاء والخلايا في المختبر وحفظها ونقلها لأغراض مختلفة. في جوهرها ، إنها بيئة مغذية تحاكي بشكل مصطنع النمو في الجسم الحي ، بحيث يمكن للخلايا أن تنمو وتتكاثر في هذه البيئة. نظرًا لأن عدد مكوناته واضح ويمكنه ملاحظة التغيرات البيولوجية المختلفة للكائن المدروس من خلال تنظيم مكون معين ، فإنه يستخدم على نطاق واسع في أبحاث بيولوجيا الخلية. تشتمل مكونات محلول زراعة الخلايا بشكل أساسي على الماء ، والأحماض الأمينية ، والفيتامينات ، والكربوهيدرات ، والأيونات غير العضوية ، وعوامل النمو ، وما إلى ذلك ، يجب اختيار هذه المكونات واختبارها بدقة قبل استخدامها. يجب أن تفي المياه المستخدمة بمتطلبات مياه الاختبار من الدرجة الثانية (CB / T 6682-1992).