ما هي المعدات المستخدمة بكثرة في زراعة الخلايا؟
1. منضدة نظيفة للغاية
في الوقت الحاضر ، تستخدم الغالبية العظمى من مختبرات الخلايا مناضد عمل فائقة النظافة لتحقيق عملية معقمة ، مع عملية بسيطة ، وتركيب مناسب ، واحتلال مساحة صغيرة وتأثير تنقية جيد. تقدم Anhui Renhe Purification نوعين رئيسيين من طاولات العمل فائقة النظافة - نوع التدفق الجانبي (النوع الرأسي) ونوع التدفق الخارجي (نوع التدفق الصفحي الأفقي). مبدأ العمل بشكل عام هو أن الهواء الداخلي يتم ترشيحه مبدئيًا بواسطة مرشح خشن ، يتم ضغطه في صندوق الضغط الساكن بواسطة مروحة الطرد المركزي ، ثم يتم ترشيحه جيدًا بواسطة مرشح الهواء عالي الكفاءة. يمر تدفق الهواء النظيف الناتج عبر المنطقة المعقمة بسرعة رياح مقطعية موحدة ، وبالتالي تشكيل بيئة عمل معقمة وخالية من الغبار مع نظافة عالية.
(1) منضدة التدفق الجانبي: يتدفق تدفق الهواء بعد تنقية الهواء من اليسار أو اليمين إلى الجانب الآخر من خلال طاولة العمل ، أو من أعلى إلى أسفل أو من أسفل إلى أعلى ، مما يشكل حاجزًا لتدفق الهواء للحفاظ على منطقة العمل معقمة. هيكل طاولة العمل مغلق ؛
(2) منضدة التدفق الخارجي: يتدفق الهواء النقي نحو المشغل ، لذلك لن يتم خلط تدفق الهواء الأجنبي في العملية. هيكل طاولة العمل مفتوح ، لكن العملية التجريبية للمواد الضارة غير مواتية للمشغل. يجب فحص طاولة العمل فائقة النظافة بانتظام للتأكد من نظافتها من قبل الإدارات ذات الصلة. يجب أن تصل نظافة طاولة العمل فائقة النقاء التي تفي بالمتطلبات إلى الدرجة 100 ، ويجب اختبار حجم الجسيمات باستخدام عداد جسيمات الغبار ≤ 5 μ ويجب ألا يتجاوز عدد جزيئات الغبار بالمتر 3.5 / لتر ؛ يجب التحكم في تدفق الهواء في حدود 0.75-1.0 متر مكعب / ثانية ؛ متوسط عدد المستعمرات البكتيرية أقل من 1 ، ويحتاج المرشح إلى الاستبدال إذا لزم الأمر حسب درجة التعقيم.
2. مجهر
يعتبر المجهر المقلوب من المعدات الضرورية للعمل اليومي لمختبر زراعة الخلايا ، والذي يستخدم بشكل أساسي للفهم اليومي لنمو الخلايا ومراقبة ما إذا كان هناك تلوث. إذا سمحت الأموال ، يوصى باستخدام مجهر تباين طوري عالي الجودة أو مجهر تشريحي أو مجهر فلورسنت أو نظام تسجيل فيديو أو جهاز تصوير فيلم بفاصل زمني مزود بنظام تصوير لالتقاط الصور وتسجيل نمو الخلايا في أي وقت.
3. حاضنة
مثل الخلايا في الجسم الحي ، تحتاج الخلايا المستنبتة في المختبر إلى البقاء على قيد الحياة عند درجة حرارة ثابتة. بشكل عام ، درجة حرارة النمو المثلى هي 37 ℃ ، ويجب ألا يتجاوز فرق درجة الحرارة ± 0.5. عندما ترتفع درجة الحرارة بمقدار 2 ℃ ، تصبح غير مواتية لبقاء الخلية ، وتموت الخلايا قريبًا عندما تصل درجة الحرارة فوق 40 ℃. لذلك ، فإن الحاضنة الثرموستاتية وحاضنة ثاني أكسيد الكربون التي يمكنها التحكم بدقة في درجة الحرارة هي الخيار الأفضل.
(1) حاضنة درجة حرارة ثابتة: يجب اختيار حاضنة للتحكم التلقائي في درجة الحرارة من نوع الترانزستور ، والتي تتميز بحساسية عالية وتحكم مستقر في درجة الحرارة. الحاضنة الثرموستاتية العامة أرخص ، لكن عيبها أنها مناسبة فقط للزراعة المغلقة.
(2) حاضنة ثاني أكسيد الكربون: في الوقت الحاضر ، تم استخدام معظم غرف زراعة الخلايا على نطاق واسع. تتمثل ميزة حاضنة ثاني أكسيد الكربون في أنها يمكن أن توفر كمية معينة من ثاني أكسيد الكربون (التركيز الشائع 5٪) المطلوب لزراعة الخلايا ، ومن السهل تثبيت درجة الحموضة في وسط الاستزراع ، وهو مناسب للفتح أو شبه المفتوح الثقافة. عند استخدام زجاجة الثقافة ، من أجل الحفاظ على تهوية الزجاجة من الداخل مع العالم الخارجي ، يمكن فك غطاء الزجاجة قليلاً. من أجل تجنب تلوث الخلايا ، عند استخدام طريقة الاستزراع هذه ، يجب الحفاظ على الهواء الموجود في صندوق الاستنبات نظيفًا ، ويجب تطهيره بانتظام بالأشعة فوق البنفسجية أو الكحول. في نفس الوقت ، يجب وضع الخزان الذي يحتوي على الماء المقطر المعقم في صندوق الثقافة لمنع تبخر محلول المزرعة ،
(3) مستهلكات زراعة الخلايا: يمكن استخدام أطباق المزرعة أو الأطباق أو الزجاجات لزراعة الخلايا.
4. فرن (فرن تجفيف)
يجب تجفيف بعض الأدوات والأوعية المستخدمة في زراعة الخلايا قبل الاستخدام ، ويجب تعقيم الأواني الزجاجية بالحرارة الجافة. أثناء التطهير بالحرارة الجافة ، يجب أن تصل درجة الحرارة في الفرن عمومًا إلى أكثر من 160 درجة مئوية ، وعادة ما يتم استخدام فرن نفخ الهواء. مزاياه هي درجة حرارة موحدة وتأثير جيد ، في حين أن عيوبه هي عملية التسخين البطيئة. عند التسخين ، لا يُسمح بالتسخين قبل النفخ ، ولكن يجب أن يبدأ النفخ والتسخين في نفس الوقت. عندما تصل درجة الحرارة إلى 100 ℃ ، يجب إيقاف النفخ. يجب الحرص على تجنب احتراق الأواني بالورق أو القطن. يمكن أن يؤثر الحطام المحترق على نمو الخلايا. بعد التطهير ، لا يمكن فتح باب الصندوق على الفور لتجنب كسر الأواني الزجاجية بسبب التبريد المفاجئ.
5. جهاز تنقية المياه
جودة المياه المستخدمة في زراعة الخلايا عالية. يجب تنقية الماء لتحضير ثقافة الخلية ، والسائل المرتبط بثقافة الخلية والماء لتنظيف أواني زراعة الخلايا بشكل صارم مسبقًا. في الوقت الحاضر ، هناك مجموعة متنوعة من طرق التنقية مجتمعة لجعل استخدام أجهزة المياه النقية التي يمكنها تنقية المياه العادية إلى مياه نقية ومياه عالية النقاء مرنة ومريحة للغاية. يمكن تركيبها على الحائط ، أو سطح المكتب ، أو مزودة بخزانات تخزين المياه ، أو استخدامها مباشرة مع مسدس فصل السوائل. يمكن أيضًا تهيئتها بوظائف التعقيم وفقًا لمتطلبات الأنواع المختلفة من المياه التجريبية ، وإزالة إنزيمات الحمض النووي ، وإنزيمات الحمض النووي الريبي ، والبروتياز ، وما إلى ذلك بشكل فعال ، فضلاً عن أجهزة الترشيح الفائق للمياه النقية التي يمكنها إزالة مصادر الحرارة والسموم الداخلية بشكل فعال.
6. ثلاجة
يجب تخصيص المعدات اللازمة لمختبر زراعة الخلايا ، ويجب ألا تخزن المواد المتطايرة والقابلة للاشتعال وغيرها من المواد الضارة بالخلايا ، ويجب أن تظل نظيفة. بشكل عام ، يشمل ثلاجات عادية وثلاجات منخفضة الحرارة وثلاجات ذات درجة حرارة منخفضة للغاية.
الثلاجة العادية: يمكنها تخزين سائل المزرعة ، والمحلول الملحي العادي ، وكاشف هانكس السائل ومواد الاستزراع الأخرى ، ويمكن تخزين عينات الأنسجة لفترة قصيرة.
- ثلاجة بدرجة حرارة منخفضة 20 درجة مئوية وثلاجة ذات درجة حرارة منخفضة للغاية: تستخدم لتخزين المستحضرات التي تحتاج إلى التجميد للحفاظ على النشاط البيولوجي وتحتاج إلى التخزين لفترة طويلة ، مثل الإنزيمات والمصل وما إلى ذلك.
7. ناظم الخلية
يمكن تقسيم حاويات النيتروجين السائل الشائعة الاستخدام في الخزان إلى أنواع ومواصفات مختلفة وفقًا لاحتياجات الاستخدام. يجب مراعاة ثلاثة عوامل عند اختيار حاوية النيتروجين السائل: حجم الحجم وسهولة الوصول والاستخدام وتطاير النيتروجين السائل. حجم حاوية النيتروجين السائل بشكل عام 25-500 لتر ، والتي يمكن أن تخزن حوالي 250-15000 1 مل من أنابيب التبريد. يمكن أن تصل أدنى درجة حرارة للنيتروجين السائل إلى - 196 درجة مئوية ، لذا انتبه لتجنب قضمة الصقيع عند الاستخدام. نظرًا لأن النيتروجين السائل متقلب ، فمن الضروري مراقبة كمية النيتروجين السائل المتبقي وتكميله في الوقت المناسب لتجنب تلف الخلايا أو الموت بسبب عدم كفاية النيتروجين السائل. في الوقت الحاضر ، هناك العديد من حاويات الحفظ بالتبريد الذكية للخلايا للاختيار من بينها. يمكن لحاويات النيتروجين السائل المجهزة بوحدات تحكم إلكترونية أن تحقق حفظًا آليًا بالتبريد ؛ يمكن مراقبة مستوى النيتروجين السائل ودرجة حرارة العينة للتأكد من أن درجة حرارة العينة تكون دائمًا عند نقطة درجة الحرارة المحددة ؛ يمكن تكوين نظام الإنذار للتنبيه في حالة مستوى النيتروجين السائل ودرجة الحرارة والبطارية والجهد وإمدادات الطاقة وغيرها من العيوب ؛ في الوقت نفسه ، يتم توفير نظام تجاوز الغاز الساخن لمنع الهواء الدافئ الأعلى من - 130 ℃ من دخول خزان النيتروجين السائل ، وذلك لحماية العينة بشكل أكثر فعالية ومنع ارتفاع درجة الحرارة في الحاوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اختيار خزان إمداد النيتروجين السائل لتكملة النيتروجين السائل لخزان التخزين من خلال أنبوب التوصيل لضمان سلامة العينة. يمكن مراقبة مستوى النيتروجين السائل ودرجة حرارة العينة للتأكد من أن درجة حرارة العينة تكون دائمًا عند نقطة درجة الحرارة المحددة ؛ يمكن تكوين نظام الإنذار للتنبيه في حالة مستوى النيتروجين السائل ودرجة الحرارة والبطارية والجهد وإمدادات الطاقة وغيرها من العيوب ؛ في الوقت نفسه ، يتم توفير نظام تجاوز الغاز الساخن لمنع الهواء الدافئ الأعلى من - 130 ℃ من دخول خزان النيتروجين السائل ، وذلك لحماية العينة بشكل أكثر فعالية ومنع ارتفاع درجة الحرارة في الحاوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اختيار خزان إمداد النيتروجين السائل لتكملة النيتروجين السائل لخزان التخزين من خلال أنبوب التوصيل لضمان سلامة العينة. يمكن مراقبة مستوى النيتروجين السائل ودرجة حرارة العينة للتأكد من أن درجة حرارة العينة تكون دائمًا عند نقطة درجة الحرارة المحددة ؛ يمكن تكوين نظام الإنذار للتنبيه في حالة مستوى النيتروجين السائل ودرجة الحرارة والبطارية والجهد الكهربائي وإمدادات الطاقة وغيرها من العيوب ؛ في الوقت نفسه ، يتم توفير نظام تجاوز الغاز الساخن لمنع الهواء الدافئ الأعلى من - 130 ℃ من دخول خزان النيتروجين السائل ، وذلك لحماية العينة بشكل أكثر فعالية ومنع ارتفاع درجة الحرارة في الحاوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اختيار خزان إمداد النيتروجين السائل لتكملة النيتروجين السائل لخزان التخزين من خلال أنبوب التوصيل لضمان سلامة العينة. يمكن تكوين نظام الإنذار للتنبيه في حالة مستوى النيتروجين السائل ودرجة الحرارة والبطارية والجهد وإمدادات الطاقة وغيرها من العيوب ؛ في الوقت نفسه ، يتم توفير نظام تجاوز الغاز الساخن لمنع الهواء الدافئ الأعلى من - 130 ℃ من دخول خزان النيتروجين السائل ، وذلك لحماية العينة بشكل أكثر فعالية ومنع ارتفاع درجة الحرارة في الحاوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اختيار خزان إمداد النيتروجين السائل لتكملة النيتروجين السائل لخزان التخزين من خلال أنبوب التوصيل لضمان سلامة العينة. يمكن تكوين نظام الإنذار للتنبيه في حالة مستوى النيتروجين السائل ودرجة الحرارة والبطارية والجهد وإمدادات الطاقة وغيرها من العيوب ؛ في الوقت نفسه ، يتم توفير نظام تجاوز الغاز الساخن لمنع الهواء الدافئ الأعلى من - 130 ℃ من دخول خزان النيتروجين السائل ، وذلك لحماية العينة بشكل أكثر فعالية ومنع ارتفاع درجة الحرارة في الحاوية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن اختيار خزان إمداد النيتروجين السائل لتكملة النيتروجين السائل لخزان التخزين من خلال أنبوب التوصيل لضمان سلامة العينة.
8. جهاز طرد مركزي
في زراعة الخلايا ، يتم استخدام الطرد المركزي عادةً لتحضير تعليق الخلية وضبط كثافة الخلية وغسل الخلايا وجمعها. يتم تكوين جهاز الطرد المركزي لسطح المكتب بسرعة 4000 دورة في الدقيقة ؛ للقيام بترسيب الخلية ، يلزم وجود قوة طرد مركزي تبلغ 80-100 جم ، لأن قوة الطرد المركزي المفرطة ستؤدي إلى إتلاف الخلايا. وفقًا للمتطلبات المختلفة ، هناك سعة كبيرة ، وأجهزة طرد مركزي قابلة للتعديل بدرجة الحرارة ، وأجهزة طرد مركزي عالية السرعة ، وأجهزة طرد مركزي ذات درجة حرارة منخفضة للتجميد وأجهزة طرد مركزي أخرى أكثر وظيفية للاختيار من بينها.
9. التوازن
يشيع استخدام التوازن الدقيق والتوازن التحليلي. تبلغ دقة الميزان التحليلي بشكل عام 0.1 مجم و 0.01 مجم و 0.001 مجم. بشكل عام ، يتم اختيار توازن مناسب وفقًا لحجم أخذ العينات ومتطلبات الدقة: يجب اختيار توازن بدقة 0.1 مجم عندما يكون حجم العينة أكبر من 100 مجم ؛ كمية أخذ العينات هي 100-10mg ، ويتم تحديد توازن بدقة 0.01mg ؛ يجب اختيار توازن بدقة 0.001 مجم لحجم أخذ العينات البالغ 10 مجم. يجب معايرة الميزان بانتظام. يمكن تحديد الميزان مع وظيفة المعايرة التلقائية لسهولة الصيانة. عند استخدام الميزان ، انتبه إلى النظافة ، وتجنب البودرة والسوائل المسببة للتآكل التي تلامس منصة الوزن مباشرة.