طرق المراقبة الروتينية والاحتياطات الخاصة بزراعة الخلايا
طرق المراقبة الروتينية والاحتياطات الخاصة بزراعة الخلايا
بعد تلقيح الخلايا أو ثقافتها الفرعية ، يجب على المجرب إجراء فحص روتيني للخلايا كل يوم أو على الأكثر من يوم إلى يومين. مراقبة مورفولوجيا ونمو الخلايا ، فضلا عن تغيير درجة الحموضة في الثقافة ، سواء كان هناك تلوث ، وما إلى ذلك وفقا للتغيرات الديناميكية للخلايا ، قم باستبدال السوائل أو معالجة الممر. إذا تم العثور على ظروف غير طبيعية ، فاتخذ الإجراءات في الوقت المناسب.
1. يمكن رؤية الخلايا ذات حالة النمو المورفولوجي الجيدة تحت المجهر العام ، بشفافية كبيرة وانكسار قوي ومخطط تفصيلي غير واضح. عندما تنمو الخلايا بشكل سيئ ، يتم تحسين الكفاف ، وغالبًا ما تظهر الفجوات والقطرات الدهنية والجزيئات الأخرى في السيتوبلازم ، وتتضخم الفجوة بين الخلايا ، ويكون مورفولوجيا الخلية غير منتظمة أو حتى تفقد خصائصها الأصلية ، مثل الخلايا الظهارية تصبح مثل الخلايا الظهارية الخلايا. عندما تموت الخلايا ، يمكن لبعض الأصباغ أن تتحد مع الحمض النووي المتحلل من خلال غشاء الخلية المحوَّل الصفات وتجعلها ملونة. لذلك ، غالبًا ما يستخدم أزرق التريبان لتحديد الخلايا الميتة والحيوية. الخلايا الحية لا تلطخ ، والأنوية الميتة زرقاء.
2. نمو الخلية بعد الاستنبات الأولي أو تلقيح معلق الخلية المزروعة تحت الجلد ، بدأت في التكاثر بعد فترات حضانة مختلفة. عادةً ما ترى خطوط خلايا المرور أو الأنسجة الجنينية أو أنسجة اليرقات نمو الخلايا في اليوم التالي ويمكن توصيلها إلى قطع في غضون أسبوع. بعد أن تنمو الخلايا الملقحة في جميع أنحاء جدار الزجاجة ، يجب إعادة زراعتها في الوقت المناسب. خلاف ذلك ، بسبب استهلاك المغذيات وتراكم التمثيل الغذائي ، ستدخل الخلايا في فترة التوقف أو التدهور. في هذا الوقت ، يتم تحسين محيط الخلية ، وغالبًا ما تظهر الرواسب الحبيبية في الخلايا ، التي تنتفخ الميتوكوندريا. يتم تفريغ السيتوبلازم ، وتصبح الخلايا مستديرة وخشنة. في الحالات الخطيرة ، تسقط الخلايا من جدار الزجاجة. فقط من خلال الثقافة الفرعية في الوقت المناسب يمكن للخلايا أن تستمر في النمو والتكاثر.
3. في ظل الظروف العادية ، يكون محلول المغذيات أحمر الخوخ. إذا تم الحفاظ على الخلايا عند pH6.5 ~ 6.6 ، فإن الخلايا سوف تسقط وتموت. عندما يتم تحمض وسط الاستزراع ويتحول إلى اللون الأصفر ، فإنه يشير إلى أن المستقلبات في وسط الاستزراع قد تراكمت إلى كمية معينة ، ويجب استبدال وسط الاستزراع الطازج. إذا تمت إضافة HEPES إلى وسط الاستزراع أو المزروعة في حاضنة 5٪ من ثاني أكسيد الكربون ، يمكن الحفاظ على الرقم الهيدروجيني مستقرًا نسبيًا. يعتمد وقت تغيير محلول المغذيات على استهلاك العناصر الغذائية. عندما تنمو الخلية بقوة ، يمكن تغييرها كل يومين إلى ثلاثة أيام ، وعندما يكون النمو بطيئًا ، يمكن أيضًا تغييرها كل 3 إلى 4 أيام. يجب إيلاء اهتمام خاص لأن الخلايا المختلفة لها متطلبات مختلفة لقيمة الأس الهيدروجيني.
4. التلوث الجرثومي بعد التلوث الجرثومي لزراعة الخلايا المستزرعة ، ستتغير قيمة الأس الهيدروجيني ، وسيظهر وسط المزرعة عكرًا. بعد العدوى البكتيرية ، بسبب حركة البكتيريا ، هناك وميض طفيف تحت المجهر الضوئي ؛ في العدوى الفطرية ، شوهدت العديد من الخيوط الخيطية والجراثيم العنقودية تحت المجهر. لا يمكن الكشف عن تلوث الميكوبلازما إلا بمساعدة بعض طرق الكشف. بعد تلوث الخلايا ، يجب التخلص منها بشكل عام. بالنسبة لخطوط الخلايا المهمة ، يمكنك الرجوع إلى الدراسات ذات الصلة لتقديم بعض التدابير لإزالة التلوث. يجب زراعة التجارب المهمة والخلايا الثمينة وتشغيلها بواسطة مجربين اثنين على الأقل بشكل مستقل ، أو بواسطة شخص واحد في عدة مرات (في أوقات مختلفة). بالإضافة إلى الظروف الصحية لمختبر الاستزراع ، ترتبط الرطوبة في الهواء ارتباطًا وثيقًا بالتلوث الجرثومي. يجب إجراء تجارب مهمة وطويلة المدى في الخريف والشتاء عندما تكون رطوبة الهواء منخفضة.
احتياطات أخرى:
أولاً ، راقب بشكل متكرر لتحديد حالة الخلية.
ثانيًا ، ما إذا كان يجب إضافة المضادات الحيوية. هذا يعتمد على الوضع. في عملية زراعة الخلايا ، يلزم إضافة أقل عدد ممكن من الشوائب غير ذات الصلة. تعتبر المضادات الحيوية أيضًا عبئًا على الخلايا.
ثالثًا ، إذابة مصل الأبقار الجنيني. يتم تخزين المصل عمومًا عند - 20 درجة مئوية ويتم إذابته في الثلاجة عند 4 درجات مئوية ، وهو ما يستغرق وقتًا طويلاً ويحتاج إلى الذوبان قبل يوم واحد.